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液相色譜柱的選擇及維護

时间:2018-09-29编辑:上海氣譜仪器字體:
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色譜柱的選擇
 
液相色譜儀基質的選擇大致遵循以下法則,矽膠基質的填料被用于大部分的HPLC分析,尤其是小分子量的被分析物,聚合物填料用于大分子量的被分析物質,主要用來制成分子排阻和離子交換柱。
 
色譜柱在使用前,最好進行柱的性能測試,並將結果保存起來,作爲今後評價柱性能變化的參考。在做柱性能測試時要按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是最佳條件),只有這樣,測得的結果才有可比性。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同。
 


色譜柱的維護
 
一、 色谱柱的平衡
反相色譜柱由工廠測試後是保存在乙腈/水中的。新柱應先使用10-20倍柱體積的甲醇或乙腈沖洗色譜柱。請一定確保您分析樣品所使用的流動相和乙腈/水互溶。每天用足夠的時間以流動相來平衡色譜柱,您就會在處理問題方面獲得最大的"補償"。
 
二、色譜柱的再生
長期使用的色譜柱,往往柱效會下降(柱子的理論塔板數減低)。可以對色譜柱進行再生,在有條件的實驗室應使用一個廉價的泵進行柱子的再生。建議用來沖洗柱子的溶劑體積。
 
三、 色譜柱的維護

 使用預柱保護分析柱(矽膠在極性流動相/離子性流動相中有一定的溶解度)

 大多數反相色譜柱的pH穩定範圍是2-7.5,盡量不超過該色譜柱的pH範圍

 避免流動相組成及極性的劇烈變化

 如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動相,應在實驗完畢柱子沖洗幹淨,並保存于甲醇或乙腈中

 氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性,故使用時要注意,柱及連接管內不能長時間存留此類溶劑,以避免腐蝕。

 流動相使用前必須經脫氣和過濾處理